本文所有文字均来自中信出版社出版，悉达多·穆克吉编著的《众病之王：癌症传》。

RB1的发现——证实二次突变假说

20世纪80年代中期，癌症遗传学家利用技术分析了视网膜母细胞瘤的染色体，证明RB1基因位于第13对染色体。但是如何从包含成千上万基因的染色体中分离出一个只有失活时其功能才会彰显的基因呢？眼科医师、遗传学家Thad Dryia认为，每个正常细胞都有两个RB基因副本（等位基因），分别位于13号染色体的两个副本上；如果“二次突变假说”正确，那么视网膜母细胞瘤的RB基因应该会在两条染色体上分别发生两次独立的失活性突变，突变有很多种形式——可能是DNA的微小变化，也可能是基因结构的巨大变化，而由于是RB基因失活引起的视网膜母细胞瘤，因此Dyria推断，或许这是一次缺失突变导致了RB基因的失活。

Dyria怀疑，大部分视网膜母细胞瘤中，RB基因的两个副本的两次缺失位于基因不同部分，这是因为很少会有引起肿瘤的两次突变恰好删除了两条姐妹染色单体上基因的相同部分——如果发生这种情况，那么这段染色体会在细胞中完全消失；而如果找到一种方法，可以找到视网膜母细胞瘤细胞中第13号染色体上完全消失的片段，那么就能定位RB基因。

为了识别这个缺失的片段，Dyria利用13号染色体DNA探针，并且从他多年来收藏的视网膜母细胞瘤肿瘤标本中提取染色体，然后在染色体中使用探针装置进行搜寻：如果探针结合了，说明肿瘤细胞中存在这个DNA片段，它们会在胶质上发出信号；而如果探针没有结合，说明肿瘤细胞中不存在这个DNA片段，则信号是空白的。终于在某一天，Dyria在一个肿瘤中看到了一个空白区——被称为H3-8的探针在那个肿瘤的两条染色体中都缺失了。

Dyria使用他的H3-8探针，与科学家Steve Friend合作，捕获并分离出附着于H3-8探针的正常细胞细胞的基因。当Dyria在他的肿瘤样品储藏库中进一步检测候选基因时，发现了完全符合Knudson十多年前假设的事实：视网膜母细胞瘤细胞的两个基因副本都发生了失活——两次打击，而正常细胞基因则含有两个正常的副本。

1986年10月，科学家们在《自然》上发表了他们的结论。

摘自：《众病之王：癌症传》